本发明公开了一种穿心莲的组织培养方法,包括以下步骤:S1外植体处理:采集穿心莲完整腋芽作为外植体,消毒杀菌备用;S2愈伤组织培养:将腋芽放入愈伤组织培养基中,首先暗培养,随后光培养;S3诱芽培养:光培养7‑10天即可;4增殖培养:将获得的幼芽转入继代增殖培养基中继续光培养;S5生根培养:转到生根培养基上光培养3‑5天;S6炼苗:将生根后的幼苗放在营养液内,光培养15‑20天;其中:所述生根培养基配方为:1/3MS:+0.1‑0.12mg/L的NAA、+0.08‑0.12mg/L的BR1、+0.06‑0.08mg/L的青霉素、+20g/L的蔗糖和+6.5g/L的琼脂,pH5.8‑6.0。本发明的培养方法具有使得穿心莲植物组织培养的发芽率、生根率以及成活率高的优点。