本发明公开了一种小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的HPLC定性方法,小麦经提取,免疫亲和柱净化,得待测液;采用HPLC方法检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇的标准样和所述的待测液;通过DAD检测器对标准样的DON峰和待测液的DON目标峰进行紫外扫描,比对紫外扫描的光谱图,用于定性判断待测液中的目标峰;HPLC的检测条件为:色谱柱为C18反相柱;流动性为24~26v%的甲醇水溶液;检测波长为235~241nm。标准样的DON峰和待测液的DON目标峰比对的匹配度高于95%以上,待测液的DON目标峰为脱氧雪腐镰刀菌烯醇的色谱峰。本发明定性方法检测限低,结果判断准确,且相对于现有的HPLC‑MSMS定性方法,成本低廉,操作简单,容易推广。