本发明提供了式(I)所示的一系列5‑甲基‑2‑(吡啶‑2‑基氨基)‑8H‑吡啶并[2,3‑d]嘧啶‑7‑酮类化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体或外消旋体、前药分子和溶剂合物，其作为细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4和/或CDK6选择性抑制剂，可用于治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶信号通路有关的疾病。更特别地，该类化合物可有效抑制多种肿瘤细胞的生长，可用于制备抗肿瘤药物，用于不同的癌症的治疗、联合治疗或预防。
1.下式Ⅰ所示的化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体或外消旋体：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="534"/>其中，R¹选自以下基团：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>R³选自以下基团：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>
2.根据权利要求1中式I所示的化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体或外消旋体，其中，R¹选自以下基团：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>R³选自以下基团：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>
3.下式I所示的化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体或外消旋体，ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="532"/>其中，R¹选自以下基团：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="614"/>R³选自以下基团：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>
4.选自以下的化合物：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>
5.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体或外消旋体，其中，所述药学上可接受的盐包括盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、对甲苯磺酸盐、水杨酸盐、甲磺酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、富马酸盐。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体或外消旋体用于制备治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶信号通路有关的疾病的药物中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其中，所述的化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体或外消旋体作为细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4和/或CDK6选择性抑制剂。
8.根据权利要求6或7所述的用途，其中，所述与细胞周期蛋白依赖性激酶信号通路有关的疾病包括乳腺癌，神经母细胞瘤、恶性横纹肌瘤、胶质瘤、肺癌、结肠直肠癌、胃癌、胃肠道基质瘤(GIST)、肝细胞癌、前列腺瘤、肉瘤、卵巢癌、宫颈癌、胰腺癌、黑色素瘤、甲状腺癌、胆管癌、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、淋巴瘤、白血病、非霍奇金淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、急性髓细胞白血病(AML)、多发性骨髓瘤。
9.一种药物组合物，所述药物组合物含有：治疗有效量的选自根据权利要求1-5中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、外消旋体和它们的混合物中的一种；和任选地药学上可接受的载体。技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及5-甲基-2-(吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮类化合物或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、外消旋体或它们的混合物、前药、溶剂化合物及其制备方法，包含这些物质的药物组合物以及其用途。
背景技术
癌症的一个主要标志就是细胞周期失调引起的的无节制的生长。在正常情况下，细胞必须经过四个阶段的细胞周期进行生长，分裂和复制：G1期(生长期)，S期(DNA合成期)，G2和M期(有丝分裂期)。在细胞周期中每个阶段都由被称为细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase，CDK)的调控。决定G1-S期过渡的关键调节蛋白激酶就是CDK4，它和细胞周期蛋白D(cyclin D)形成一个复合体，将视网膜母细胞瘤(Rb)的蛋白质磷酸化。肿瘤抑制蛋白Rb一旦发生磷酸化，可释放其在未被磷酸化的状态下紧密结合的转录因子E2F，而E2F激活进一步转录并推动细胞周期通过限制检查点(restriction checkpoint，R点)。细胞一旦通过R点就不可逆的进入S期。在S期的后期和G2期，CDK1和CDK2与他们的合作伙伴细胞周期蛋白A和B一同合作发挥重要的作用，推动细胞进入M期，完成细胞的分裂与生长周期。在癌细胞中，细胞周期调控受到破坏，癌细胞变得毫无节制地生长、分裂和复制，因此针对调节细胞周期的通路来寻找和发现选择性和强效CDK抑制剂，成为多年来肿瘤学药物研究的主要目标。针对CDK4和/或CDK6的选择性靶向治疗药物可以在以下几种机制中发挥作用：(1)CDK4基因扩增或蛋白的高表达，这种变化经常出现在高分化和去分化的脂肪肉瘤，并且也在一些其它实体瘤和血液恶性肿瘤；(2)细胞周期蛋白D1的扩增或高表达，这在套细胞淋巴瘤，也在多种实体瘤中观察到；(3)p16INK4A基因(CDKN2A)的损失，这也是在许多癌症中常见的事件。在细胞里，p16INK4A蛋白是CDK4的天然抑制剂，有p16损失癌症一般可能对CDK4的抑制敏感。例如在卵巢癌中，这些癌细胞系具有低p16蛋白水平和高Rb的表达，会对CDK4的抑制剂是比较敏感。因为CDK6和CDK4的蛋白的高度相似性，目前的CDK4抑制剂同时也对CDK6蛋白激酶有类似的抑制作用。目前有三个CDK4/CDK6抑制剂已进入临床试验：palbociclib(PD0332991),LEE011和LY2835219，这些抑制剂使CDK4/6无法与Cyclin D形成复合物，有效的阻滞了细胞周期自G1期向S期的进程，从而达到抑制肿瘤细胞增殖的目的，并在乳腺癌，神经母细胞瘤，恶性横纹肌瘤，淋巴瘤，肉瘤和其它肿瘤中表现出单剂或与其他靶向治疗药物组合的抗肿瘤活性。
发明内容
本发明提供了一系列5-甲基-2-(吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮类化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、外消旋体、前药分子或溶剂合物，可用于制备治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶信号通路有关的疾病的药物。本发明提供了以下式Ⅰ所示的化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、外消旋体、前药分子或溶剂合物，ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="544"/>其中，R¹选自以下基团：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>其中，R²和R²’各自独立地选自H,氘(D)，C1-C4烷基，氟和氰基，并且，R²和R²’可以在同一个或不同碳原子上；n＝1或2R³选自以下基团：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>其中，R⁴选自H，氘(D)和C1-C4烷基，W选自CH₂,CH₂CH₂,O和NHX选自CH和NY选自CH₂,NH和Om＝0，1或2n＝0，1或2；优选地，R¹选自以下基团：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>R³选自以下基团：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>更优选地，R¹选自以下基团：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>R³选自以下基团：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>更优选地，R¹选自以下基团：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>R³选自以下基团：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>优选地，本发明的5-甲基-2-(吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮类化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、外消旋体、前药分子或溶剂合物包括如下化合物：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>其中，以上化合物包括其对映异构体、非对映异构体、外消旋体和其混合物、前药分子或溶剂合物，例如化合物1具有对映异构体1A和1B，化合物5具有对映异构体5A和5B，化合物7具有对映异构体7A和7B，化合物24具有非对映异构体24A和24B，化合物25具有非对映异构体25A和25B，化合物26具有非对映异构体26A和26B和非对映异构体27A和27B。最优选地，所述化合物选自以下化合物：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="478"/>ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>其中，cis表示顺式，trans表示反式。也即，上述具体化合物为如下化合物：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="608"/>本发明的另一方面还提供了所述5-甲基-2-(吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮类化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、外消旋体、前药分子或溶剂合物在制备CDK4和/或CDK6选择性抑制剂中的应用。本发明的另一方面还提供了所述5-甲基-2-(吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、外消旋体、前药分子或溶剂合物，尤其是作为CDK4和/或CDK6选择性抑制剂用于制备治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶信号通路有关的疾病的药物中的用途。所述与细胞周期蛋白依赖性激酶信号通路有关的疾病包括肿瘤，例如乳腺癌，胶质瘤、胶质母细胞瘤、肺癌、结肠直肠癌、胃癌、胃肠道基质瘤(GIST)、肝细胞癌、前列腺瘤、肉瘤、卵巢癌、宫颈癌、胰腺癌、黑色素瘤、甲状腺癌、胆管癌、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、淋巴瘤、白血病、非霍奇金淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、急性髓细胞白血病(AML)、多发性骨髓瘤。本发明的另一个方面提供了一种药物组合物，所述药物组合物含有：治疗有效量的选自上述根据本发明的5-甲基-2-(吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮类化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、外消旋体和它们的混合物、前药分子和溶剂合物中的一种或多种；和任选地药学上可接受的载体。所述药物组合物可用于体内治疗并具有生物相容性。本发明的又一目的是提供一种本发明所述的化合物，其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、外消旋体、前药分子或溶剂合物与其他的抗肿瘤药物(包括化疗，肿瘤免疫疗法)联合治疗癌症的方法，包括同时、分别或先后联合施用所述的化合物，其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、外消旋体、前药分子或溶剂合物与其他的抗肿瘤药物。在这种联合疗法中，其他抗肿瘤药物与本发明化合物及其盐或前药可以并列、同时地、序贯地、或分别地给药，并且可包含但不限制于以下类型的抗肿瘤剂的一种或多种：烷化剂(例如卡钼、奥沙利钼、顺钼、环磷酰胺、亚硝基脲类、氮芥、美法仑),抗代谢药(例如吉西他滨),和抗叶酸剂(例如5-氟尿嘧啶和替加氟、雷替曲塞、甲氨喋呤、阿糖胞苷、羟基脲),拓扑异构酶抑制剂(例如依托泊苷、托泊替康、喜树碱),抗有丝分裂剂(例如长春新碱、长春碱、长春瑞滨,紫杉醇、泰索帝)，抗肿瘤抗生素(例如阿霉素、博来霉素、多柔比星、道诺霉素、丝裂霉素C、放线菌素)，抗雌激素药(例如他莫昔芬、氟维司群、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬)，抗雄激素药(例如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特)、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林、和布舍瑞林)，芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑、来曲唑)，CYP17裂解酶抑制剂(例如阿比特龙)，抗erbB2抗体曲妥珠单抗[赫赛汀]，抗EGFR抗体西妥昔单抗[Erbitux]；酪氨酸激酶，丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制剂(例如伊马替尼，尼洛替尼，索拉非尼，曲美替尼(trametinib)，达拉非尼(dabrafenib)，拉帕替尼(lapatinib))，抗人血管内皮细胞生长因子抗体贝伐珠单抗(阿瓦斯丁)以及VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂(例如阿帕替尼)，免疫肿瘤治疗方法，例如抗PD-1抗体(pembrolizumab，nivolumab)，抗PD-L1抗体，抗LAG-3抗体，抗CTLA-4抗体，抗4-1BB抗体，抗GITR抗体，抗ICOS抗体，抗OX40抗体，白细胞介素2。根据本发明，所述药学上可接受的盐为常规的药学上可接受的盐，包括盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、对甲苯磺酸盐、水杨酸盐、甲磺酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、富马酸盐等。本发明的化合物或者其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、外消旋体、前药分子或溶剂合物，还包括其多晶型，即化学药物分子在不同的物理化学条件下结晶成的结构不同的晶体。根据本发明的5-甲基-2-(吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮类化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、外消旋体、前药分子或溶剂合物，具体按照如下路线制备：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：氮气保护下，在三口瓶中，加入A，5-溴-2,4-二氯嘧啶，碳酸钾和1,4-二氧六环，室温搅拌反应过夜。加入乙酸乙酯，盐水洗。有机相无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析，收集产品得化合物B。步骤2：氮气保护，三口瓶中，加入B，巴豆酸，N,N-二异丙基乙胺，保温搅拌10分钟，加入三(2-甲苯基)膦，二(苯腈)二氯化钯，加毕，氮气置换三次，加热反应过夜。降至室温，加入乙酸乙酯稀释，饱和食盐水反洗。有机相用无水硫酸钠干燥，旋干，得化合物C用于下一步反应。步骤3：在三口瓶中，氮气保护下，将C溶于重蒸四氢呋喃中，加入醋酸酐，加热反应过夜。降至室温，加入乙酸乙酯稀释，饱和食盐水反洗。有机相用无水硫酸钠干燥，旋干溶剂后直接硅胶柱分离，得到固体D。步骤4：在三口瓶中，氮气保护下，将固体D溶于醋酸中，加入醋酸钠，降温至0℃滴加溴，加毕，加热反应。降至室温，加入饱和亚硫酸氢钠淬灭反应。二氯甲烷萃取，收集有机相。饱和食盐水反洗，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂后直接硅胶柱分离得固体E。步骤5：在三口瓶中，氮气保护下，将H₂N-R的甲苯溶液降温至0℃，加入六甲基二硅基胺基锂，室温搅拌30分钟，降温至0℃，滴加E的甲苯溶液，加毕，室温反应过夜。加入二氯甲烷稀释，饱和食盐水反洗。有机相无水硫酸钠干燥，旋干溶剂后直接硅胶柱分离得固体F。步骤6：在三口瓶中，氮气保护下，将F溶于正丁醇中，加入乙烯基正丁基醚，加入N,N-二异丙基乙胺，加入催化量1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)，加毕，置换空气三次，加热反应过夜。降至室温，加入乙酸乙酯稀释，饱和食盐水反洗。收集有机相，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂后直接硅胶柱分离得固体G。步骤7：在三口瓶中，加入G，四氢呋喃。冰浴下加入6N盐酸，室温反应过夜。冰浴下调节反应液PH＝8～9，乙酸乙酯萃取，收集有机相。有机相用无水硫酸钠干燥，旋干得目标产物H。若目标产物H为立体异构体的混合物，可以通过手性分离得到光学纯的对映异构体。若目标产物H用反相柱纯化，可得三氟乙酸盐。目标产物H也可以用盐酸处理，得到盐酸盐，其中，R为ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="166"/>R¹和R³的定义同上。技术效果本发明所述5-甲基-2-(吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮类化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、外消旋体、前药分子或溶剂合物，作为新型CDK4和/或CDK6选择性抑制剂，可用于制备治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶信号通路有关的疾病或由异常细胞增殖引起的障碍或病症的药物。本发明的化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体或外消旋体、前药分子或溶剂合物对于CDK4和/或CDK6的抑制活性不但与现有技术的抑制剂的生物活性相当或更好，而且比现有技术的抑制剂具有更好的体内代谢性质，更高血药浓度，更少的有毒副作用的代谢物。
具体实施方式
在以下的实施例中将进一步举例说明本发明。这些实施例仅用于说明本发明，但不以任何方式限制本发明。样品的分析数据由以下仪器测定：液质联用:shimadzu LCMS-2020色谱柱:shimadzu shim-pack XR-ODS 3.0*50mm,2.2um核磁共振:Bruker AV-III 300MHz；Varian 400MHz氘代DMSO和MeOH:西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司。氘代氯仿：北京伊诺凯科技有限公司。重水：北京百灵威科技有限公司。手性分离HPLC仪器:shimadzu LC20AD手性柱:CHIRALPAK AD-H,CHIRALPAK IA,CHIRALPAK IB,CHIRALPAK IC,Lux3um Cellulose-4。制备高压液相色谱(Prep-HPLC)仪器仪器:Waters 2545色谱柱:1)Waters X-bridge RP18,19*150mm,5um.2)sunfire prep C18/OBD,19*150mm,5um.超临界流体色谱仪器(SFC)仪器:SFC350色谱柱:1)ChiralpakAS-H5*25cm,5um.2)CHIRALPAK AD-H SFC5*25cm,5um除另有说明外，以下实施例中所用常规试剂、药品均购自：南京药石药物研发有限公司；梯希爱(上海)化成工业发展有限公司；上海书亚医药科技有限公司；张家港爱玛特化学有限公司；(江苏)盐城市晶华化工有限公司；成都爱斯特贸易有限公司；天津法莫西医药科技有限公司；天津市光复科技发展有限公司；四川西陇化工有限公司；天津市福晨化学试剂厂；国药集团化学试剂陕西有限公司；陕西欣通化工有限公司；天津市康科德科技有限公司；西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司；上海星可生化有限公司；西安东冠蒸馏水有限公司，等公司。具体制备例如下：中间体1-6的合成ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：在2000mL三口瓶中，氮气保护下加入1-1(80g)，氨水溶液(665g,25％)。升温至60℃反应过夜。降温，向体系通氮气1小时。将体系pH值用盐酸(6N)调至4-5，旋干后溶剂后得1-2，直接投下一步。步骤2：在2000mL三口瓶中，氮气保护下加入1-2(60g)，无水甲醇(1000mL)，三乙胺(132g)。分批加入二叔丁基二碳酸酯，室温反应过夜。旋干甲醇(1000mL)，加入1500mL乙酸乙酯稀释，水3x 500mL反洗，合并有机相，无水硫酸钠干燥，粗品硅胶柱纯化(戊烷：乙酸乙酯＝50:1-20:1)得1-3。步骤3：在1000mL三口瓶中，氮气保护下加入1-3(40g)和800mL二氯甲烷中。降温到0℃，分批加入戴斯-马丁(Dess-Martin)氧化剂试剂(101g)，回到室温反应过夜。加入1000mL乙酸乙酯稀释，水3x 500mL反洗，合并有机相，无水硫酸钠干燥。粗品硅胶柱纯化(戊烷：乙酸乙酯＝30:1-10:1)得1-4。步骤4：在1000mL三口瓶中，氮气保护下加入1-4(30g)和600mL二氯甲烷中。降温到0℃，滴加二乙氨基三氟化硫(DAST,121g)，回到室温反应过夜。将体系倒入冰水中，二氯甲烷(600mL)萃取3x 500mL。无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后硅胶柱分离(戊烷：乙酸乙酯＝30:1-10:1)得1-5。步骤5：在250mL三口瓶中，加入1-5(15g)和二氯甲烷(200mL)。通入氯化氢气体后，室温反应2小时。旋干溶剂后得产品1-6。中间体2-4的合成：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：氮气保护，往250mL三口瓶中，加入2-1(10g)，叠氮基三甲基硅烷和甲苯(120mL)。冷至20-30℃，滴加三氟化硼·乙醚(17g)室温反应24小时。静置分层，1x50mL10％碳酸氢钠水溶液洗有机相，无水硫酸钠干燥，用于下一步反应。步骤2：在氮气保护下，500mL三口瓶中，加入2-2的甲苯溶液，乙醚(100mL)。然后慢慢加入三乙氧基磷(16.3g)，完毕，室温反应2天。旋干得无色透明油状物，用于下一步反应。步骤3：氮气保护，在100mL三口瓶中，加入2-3(23g)，对甲基苯磺酸(9.51g)，乙醇(60mL)和水(0.8g)，80℃反应过夜。旋干，残余物加入100mL乙醚，抽滤，收集滤饼。滤饼用3x30mL乙醚洗，烘干得目标产物2-4。中间体3-4的合成ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：在2000mL四口瓶中，氮气保护下加入500mL N,N-二甲基亚砜。降温至20-25℃，分批加入氢化钠(19g)，然后在此温度下分批加入三甲基碘化亚砜(118g)，并在该温度下搅拌1小时,在20℃下滴加3-1(40g)的N,N-二甲基亚砜(100mL)溶液。该体系在20-25℃搅拌30分钟后升温至50℃并反应2小时。反应结束后，降温，倒入冰水中淬灭。用3x1000mL无水乙醚萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液在低于30℃下旋干，得到3-2(粗品)。步骤2：在2000mL三口瓶中，氮气保护下加入3-2(90g)，水(900mL)，盐酸羟胺(82.8g)，乙酸钠(153g)。升温至80℃反应2小时。降温后用乙酸乙酯萃取4x500mL，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩后硅胶柱分离(乙酸乙酯/戊烷＝1:30-1:10)得3-3。步骤3：在2000mL四口瓶中，氮气保护下加入氢化铝锂(34g)和600mL四氢呋喃中。降温到0℃，将3-3溶于400mL四氢呋喃中，滴加到上述体系中，回到室温反应过夜。0℃缓慢加入34mL水淬灭。然后再加102mL氢氧化钠(15％)水溶液和34mL水。抽滤，滤饼用四氢呋喃5x100mL洗。所得滤液旋干，得到3-4。中间体4-6的合成ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：氮气保护下，1L三口瓶中加入氢氧化钾(46g)，水(12mL)，乙醇(225mL)。冰浴下滴加4-1(130g)。加毕室温反应10分钟，反应结束。过滤，收集滤饼。乙醚500mL淋洗滤饼，烘干，得4-2。步骤2：氮气保护下，2L三口瓶中加入4-2(140g)，N,N-二甲基亚砜(1000mL)，1，2-二溴乙烷(174g)。室温反应过夜。倒入1L水中淬灭反应，乙醚萃取(300mL x 3)，盐水洗。有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，得4-3。步骤3：氮气保护下，2L三口瓶中加入4-3(210g)，六甲基磷酰三胺(1000mL)，氯化锂(19g)。升温至140℃反应过夜。减压蒸馏，100℃收集产品得4-4。步骤4：氮气保护下，500mL三口瓶中加入4-4(16g)，乙醇(150mL)，水(150mL)，盐酸羟胺(20g)，碳酸钠(30g)。室温反应过夜。加入50mL水，乙酸乙酯萃取(100mL x3)，收集有机相。食盐水洗(200mL x 2)。有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得4-5。步骤5：氮气保护下，500mL三口瓶中加入4-5(6g)，四氢呋喃(200mL)。降温至0℃，分批加入氢化铝锂(5.5g)。加毕，升温至55℃反应5小时。降温至0℃，加入5.5mL水。用1N的氢氧化钠水溶液调pH＝7。再加入5.5mL的水和200mL的乙酸乙酯。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液。滤液干燥后在滤液中加入5.5g草酸，搅拌30分钟，过滤，收集滤饼得4-6的草酸盐。中间体5-3的合成ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：氮气保护下，500mL三口瓶中加入5-1(20g)，乙醇(250mL)，盐酸羟胺(16g)，吡啶(18.6g)。升温至80℃反应过夜。降至室温，加入200mL水，乙酸乙酯萃取(200mL x 3)，食盐水洗(500mL x 5)。有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得5-2。步骤2：氮气保护下，500mL三口瓶中加入5-2(18g)，四氢呋喃(500mL)。降温至0℃，分批加入氢化铝锂(16g)。加毕，室温反应过夜。降温至0℃，加入16mL水。用氢氧化钠溶液(1N)调反应液pH＝7。加入水16mL，200mL的二氯甲烷分层。分出有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得5-3。中间体6-4的合成ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：氮气保护下，在2000mL三口瓶中，加入6-1(60g)，甲苯(600mL)，三乙胺(81g)，二苯基磷酰基叠氮(DPPA,191g)。反应体系在100℃反应1小时。然后降温至40-50℃下滴加苯甲醇。滴完后升温至100℃,反应过夜。降至室温，加入500mL乙酸乙酯稀释，食盐水洗500mL x 3。有机相用无水硫酸钠干燥，旋干溶剂后硅胶柱分离得6-2。步骤2：在2000mL三口瓶中，氮气保护下加入6-2(50g)，二氯甲烷(1000mL)。降温至0℃，滴加二乙基锌(276mL,1M)。然后滴加入二碘甲烷(73g),并在此温度反应1小时后，室温反应过夜。反应液用3x 500mL水反洗，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩后硅胶柱分离(洗脱剂戊烷：乙酸乙酯＝50:1-20:1)得6-3.步骤3：在1000mL单口瓶中，氮气保护下加入无水甲醇(600mL)，6-3(45g)和有水钯碳(10g,10％)。室温加氢反应过夜。抽滤后，收集滤液，旋干溶剂得6-4。中间体7-6的合成ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：在2000mL三口瓶中，氮气保护下加入7-1(80g)，三乙胺(107g)，二苯基磷酰基叠氮(DPPA,255g)，无水甲苯(800mL)。100℃反应1小时，然后降温至40-50℃，在该温度下滴加苯甲醇(114g)，滴完后升温至100℃反应过夜。降温，加入500mL乙酸乙酯稀释，食盐水洗500mL洗3次，有机相硫酸钠干燥，过滤，旋干后硅胶柱分离(乙酸乙酯/戊烷＝1:100-1:50)得7-2。步骤2：在2000mL三口瓶中，氮气保护下加入7-2(50g)，四氢呋喃(500mL)。降温至0℃，滴加硼烷四氢呋喃溶液(450mL,1M)，并在此温度反应1小时后，室温反应过夜。降至0℃，加入100mL水，滴加氢氧化钠(350mL,10％)，0℃下滴加双氧水(250mL，30％)，室温反应5小时。降温后乙酸乙酯萃取500mL萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后硅胶柱分离(乙酸乙酯/戊烷＝1:50-1:30)得7-3。步骤3：在3L四口瓶中，氮气保护下，加入7-3(40g)和二氯甲烷(1600mL)。降温到0℃，分批加入氯铬酸吡啶鎓(PCC,54g)，回到室温反应4小时。加入水，二氯甲烷稀释。分离，水相用二氯甲烷萃取3次。无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后硅胶柱分离(乙酸乙酯/戊烷＝1:20-1:10)得7-4。步骤4：在2000mL四口瓶中，氮气保护下加入7-4(33.8g)和三氯甲烷(1500mL)中，降温到0℃，滴加二乙氨基三氟化(DAST,116g)。回到室温反应过夜。将体系倒入1000mL冰水中淬灭，乙酸乙酯1000mL萃取3次，500mL水反洗4次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后硅胶柱分离(乙酸乙酯/戊烷＝1:50-1:20)得7-5。步骤5：在1000mL单口瓶中，氮气保护下加入7-5(30g,0.12mol)和甲醇(500mL)、有水钯碳(6g,10％)。通入氢气后，室温反应过夜。抽滤，滤液加入10mL浓盐酸，旋干后得产品7-6的盐酸盐。中间体8-5的合成ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：0℃条件下，向250mL圆底烧瓶中依次加入乙醚(150mL)，氘代氢化铝锂-d4(2.15g)，8-1(15g)。40℃搅拌过夜。依次加入水(2.15mL)，15％氢氧化钠(2.15mL)，水(6.45mL)，过滤，滤液用无水硫酸钠干燥，浓缩，减压蒸馏得到8-2。H-NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ1.77-1.75(m,4H),1.55(d,J＝2.8Hz,4H)。步骤2：0℃条件下，向500mL圆底烧瓶中依次加入8-2(6g),二氯甲烷(200mL),三乙胺(14g)。滴加甲基磺酰氯(11.8g)，搅拌1小时。依次用1N盐酸(100mL)和饱和碳酸氢钠(150mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得到8-3。H-NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ2.97(s,3H),1.90-1.83(m,4H),1.82-1.77(m,2H),1.74-1.65(m,2H)。步骤3：向250mL圆底烧瓶中依次加入8-3(10g),N,N-二甲基甲酰胺(150mL),叠氮化钠(7.4g)。65℃搅拌过夜。加水100mL，乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得到8-4。H-NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ1.83-1.78(m,2H),1.74-1.66(m,4H),1.62-1.59(m,2H)。步骤4：向250mL圆底烧瓶中依次加入8-4(5g),甲醇(100mL),钯碳(300mg)。通入氢气，25℃搅拌过夜。过滤，滤液加入浓盐酸5毫升，浓缩得到8-5的盐酸盐。H-NMR(400MHz,d6-DMSO,ppm):δ8.10(br s,2H),1.87-1.80(m,2H),1.68-1.64(m,2H),1.63-1.46(m,4H)。中间体10-8的合成ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：500mL单口瓶中，将叠氮化钠(32g)溶于水(300mL)中，然后冰浴下滴加氯甲酸乙酯(45g)的乙醚(100mL)溶液，体系室温搅拌过夜。向反应液中加入乙醚(300mL)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到10-2。步骤2：500mL三口瓶中，向10-2(24g)的正戊烷(200mL)溶液中加入降冰片烯(20g)，20℃搅拌4天。反应液浓缩得到10-3。步骤3：500mL单口瓶中，将10-3(55g)溶于甲醇(300mL)中，体系在40度反应2小时。反应液浓缩，减压蒸馏(70度，10mmHg真空度)得到10-4。步骤4：在40度下向四氢化萘(20g)中缓慢滴加液溴(28g)，2小时滴完，同时产生的溴化氢气体通入10-4(16g)的正戊烷(200mL)溶液中，室温反应4小时。反应液浓缩，加入乙醚(300mL)，饱和碳酸氢钠(100mL)，萃洗。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到10-5。步骤5：250mL三口瓶中，将Na(5g)缓慢加入到甲醇(100mL)中，搅拌1小时，然后加入10-5(10g)。加热体系至60度，反应16h。反应液浓缩，加入乙醚(300mL)，水(200mL)，萃洗。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，减压蒸馏(100度，5mmHg真空度)得到10-6。步骤6：100mL单口瓶中，将10-6(4.5g)溶于乙醇(40mL)中，加入10％钯碳(400mg)，氢气置换后，体系在氢气球下室温反应过夜。反应体系过滤，滤液浓缩得10-7。步骤7：100mL单口瓶中，将氢氧化钠(9g)溶于水(40mL)中，然后加入乙二醇(20mL)和10-7(7g)，加热体系至110度反应3天。冷却到室温，向反应液中加入食盐水(60mL)，用正戊烷(300mL)萃取。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到10-8。中间体11-3和15-1的合成ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：1000mL单口瓶中，将氢化钠(15.4g,60％)溶于四氢呋喃(700mL)中，然后加入己二腈(37.9g)，加热体系至回流反应过夜。向反应液中加入水(300mL)，用乙醚(3x 100mL)萃取。有机相干燥，过滤，浓缩，得到11-1。步骤2：250mL三口瓶中，向11-1(6.0g)的甲醇溶液中加入盐酸至pH＝3。保持pH＝3～4，分批次加入氰基硼氢化钠(10.5g)，室温搅拌2h。反应液浓缩，加入二氯甲烷(100mL)，分别用饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)和饱和食盐水(100mL)萃洗。有机相干燥，过滤，浓缩，得到11-2。步骤3：250mL单口瓶中，将11-2(3.0g)，N，N-二异丙基乙胺(6.86g)，5-溴-2,4-二氯嘧啶(3.0g)溶于乙腈(100mL)中，加热体系至70度反应过夜。向反应液中加入水(100mL)，用乙酸乙酯(3x 100m了)萃取。有机相干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚/二氯甲烷＝1:15:1-1:7:1)纯化，分别得到黄色固体产品11-3(1g)和15-1(2g)。中间体12-3的合成：ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：氮气保护下，向100mL三口瓶中依次加入12-1(2.3g)，5-溴-2硝基吡啶(1.99g)，25mL N,N-二甲基亚砜，三乙胺(996mg)，油浴升温至80℃反应过夜。降温至室温。加水50mL淬灭反应。75mL乙酸乙酯萃取3次。100mL饱和食盐水反洗3次。无水硫酸钠干燥，旋干。粗品硅胶柱层析(洗脱剂乙酸乙酯:戊烷＝1:5-2:1)，旋干后得到12-2。步骤2：向100mL单口瓶中依次加入12-2(2.0g)，15mL甲醇，二氯甲烷15mL，有水钯炭(60％)2.0g，甲酸铵2.0g。加毕室温反应过夜。过滤，收集滤液。滤饼用75mL二氯甲烷洗3次。收集有机相用100mL饱和食盐水反洗3次。无水硫酸钠干燥，有机相旋干后得12-3。中间体13-3的合成ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：氮气保护下，向100mL三口瓶中依次加入13-1(2.0g)，5-溴-2硝基吡啶(1.73g)，N,N-二甲基亚砜(20mL)，三乙胺(865mg)，油浴升温至80℃反应过夜。降温至室温。加水50mL淬灭反应。75mL乙酸乙酯萃取3次。100mL饱和食盐水反洗3次。无水硫酸钠干燥，旋干。粗品硅胶柱层析(洗脱剂乙酸乙酯:戊烷＝1:5-2:1)。旋干得13-2。步骤2：向100mL单口瓶中依次加入13-2(1.5g)，甲醇15mL，二氯甲烷15mL，有水钯炭(60％)1.5g，甲酸铵1.5g。加毕室温反应过夜。过滤，收集滤液。滤饼用75mL二氯甲烷洗3次。收集有机相用100mL饱和食盐水反洗3次。无水硫酸钠干燥，旋干得13-3。中间体14-3的合成ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：氮气保护下，向100mL三口瓶中依次加入14-1(2.0g)，5-溴-2硝基吡啶(1.85g)，N,N-二甲基亚砜20mL，三乙胺(925mg)，油浴升温至80℃反应过夜。降温至室温。加水50mL淬灭反应。75mL乙酸乙酯萃取3次。100mL饱和食盐水反洗3次。无水硫酸钠干燥，旋干。粗品硅胶柱层析(洗脱剂乙酸乙酯:戊烷＝1:5-2:1)。旋干后得14-2。步骤2：向100mL单口瓶中依次加入14-2(1.1g)，甲醇15mL，二氯甲烷15mL，有水钯炭(60％)1.1g，甲酸铵1.1g。加毕室温反应过夜。过滤，收集滤液。滤饼用75mL二氯甲烷洗3次。收集有机相用100mL饱和食盐水反洗3次。有机相用无水硫酸钠干燥，旋干得14-3。中间体16-2的合成ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：氮气保护下，向100mL三口瓶中依次加入8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(3.29g)，5-溴-2-硝基吡啶(4.06g)，N,N-二甲基亚砜(45mL)，三乙胺(4.06g)，油浴升温至80℃反应过夜。降温至室温。加水50mL淬灭反应。乙酸乙酯75mL萃取3次。饱和食盐水100mL反洗3次。无水硫酸钠干燥，旋干。粗品硅胶柱层析(洗脱剂乙酸乙酯:戊烷＝1:5-2:1)。旋干得16-1。步骤2：向100mL单口瓶中依次加入16-1(600mg)，甲醇15mL，二氯甲烷15mL，有水钯炭(60％)600mg，甲酸铵(804mg)。加毕室温反应过夜。过滤，收集滤液。二氯甲烷75mL淋洗滤饼3次。饱和食盐水100mL反洗3次。无水硫酸钠干燥，旋干得16-2。中间体17-5的合成ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：在氮气保护下，250mL三口瓶,将17-1a(3.0g)溶于四氢呋喃30mL中加入反应瓶，-78℃滴加双三甲基硅基氨基钾(16mL，1M)，-78℃保温反应3h。-78℃滴加17-1b(5.3g)的四氢呋喃10mL溶液，滴毕回室温反应2h。饱和氯化铵50mL淬灭反应。乙酸乙酯100mL萃取2次，合并有机相。饱和食盐水100mL反洗1次。无水硫酸钠干燥，旋干。粗品硅胶柱层析(乙酸乙酯:戊烷＝1:20)。旋干得17-2。步骤2：氮气保护下，向100mL三口瓶中依次加入17-2(2.6g)，1,4二氧六环26mL，17-2b(2.0g)，1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(0.21g)，醋酸钾(2.08g)，加毕油浴升温至80℃反应过夜。降至室温，抽滤，收集滤液。100mL水淬灭反应。乙酸乙酯100mL萃取3次。饱和食盐水100mL反洗3次。无水硫酸钠干燥，旋干。粗品硅胶柱层析(乙酸乙酯:戊烷＝1:30)。旋干得17-3。步骤3：氮气保护下，向100mL三口瓶中依次加入17-3(0.96g)，5-溴-2-硝基吡啶(1.6g)，1,4二氧六环40mL，水1.5mL，1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(0.33g)，碳酸铯(3.0g)，加毕油浴升温至85℃反应过夜,降至室温。体系倒入冰水(100mL)中。乙酸乙酯100mL萃取3次。饱和食盐水100mL反洗3次。无水硫酸钠干燥，旋干。粗品硅胶柱层析(乙酸乙酯:戊烷＝1:10-1:3)。旋干得17-4。步骤4：100mL三口瓶，17-4(900mg)溶于乙醇45mL和醋酸4mL中，升温至70℃，批量加入铁粉(696mg)，70℃反应30分钟。过滤，收集滤液。旋干。加入1M氢氧化钠调pH＝8。用乙酸乙酯100mL萃取3次，合并有机相。饱和食盐水100mL反洗1次。无水硫酸钠干燥，旋干。50mL乙醚洗1次，得17-5。中间体18-6和19-2的合成ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：在氮气保护下，100mL的圆底烧瓶中加入18-1(8g),乙醇(50mL),盐酸羟胺(5.15g),醋酸钠(2.92g)。反应混合物在80℃搅拌5小时。反应混合物冷却到室温。过滤，收集滤液。旋干。混合物中加入100mL水，用乙酸乙酯100mL萃取3次，合并有机相。饱和食盐水100mL反洗1次。无水硫酸钠干燥，旋干得18-2。步骤2：在氮气保护下，250mL三口瓶中，加入18-2(8.2g)，丙酮(50mL),水(50mL)和碳酸钠(10.86g)。在10-20℃下，5分钟内分批加入4-甲基苯-1-磺酰氯(9.79g)。所得反应混合物在室温下搅拌过夜。用50mL水淬灭。用乙酸乙酯100mL萃取3次，合并有机相。饱和食盐水100mL反洗1次。无水硫酸钠干燥，旋干。所得混合物加入己醇(100mL)。过滤收集所得产品18-3。步骤3：在氮气保护下，100ml三口瓶中，加入18-3(6.2g)，5-溴-2-硝基吡啶(5.24g),4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(2.24g),醋酸钯(579mg),碳酸铯(12.6g).在105℃下搅拌3小时。用50mL水淬灭。用乙酸乙酯100mL萃取3次，合并有机相。饱和食盐水75ml反洗2次。无水硫酸钠干燥，旋干。所得混合物过柱，用乙酸乙酯/二氯甲烷淋洗(1:10-1:1).。得到产品18-4。步骤4：拆分18-4拆分条件：手性柱,CHIRALPAK IC尺寸20mm*250mm；流动相为乙醇/正己烷＝50％/50％,得到18-5(3.34g,峰一)为白色固体，和19-1(3.66g，峰二)为白色固体。步骤5：在氮气保护下，500ml圆底瓶中，加入18-5(500mg)，甲醇(100mL),二氯甲烷(100mL),钯碳(10％)(0.5g)和甲酸铵(500mg)。在室温下搅拌过夜。过滤，旋干。得到产品18-6为白色固体。按照步骤5相似的方法，从化合物19-1得到化合物19-2。中间体20-5的合成ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：氮气保护下，向100mL三口瓶中依次加入20-1(2.7g)，乙腈60mL，三乙胺(3.86g)，0℃滴加溴苄(2.61g)，滴毕室温反3小时。反应结束后，加水50mL淬灭反应。二氯甲烷75mL萃取3次。饱和食盐水100mL反洗4次。用无水硫酸钠干燥，旋干得20-2。步骤2：氮气保护下，向100mL单口瓶中依次加入20-2(2.9g)，二氯甲烷30mL，0℃滴加三氟乙酸2mL,滴毕室温反应3小时。反应结束后加水50mL淬灭反应,碳酸氢钠饱和溶液调pH＝8。二氯甲烷50mL萃取3次,饱和食盐水75mL反洗2次,无水硫酸钠干燥，旋干得20-3。步骤3：氮气保护下，向100mL三口瓶中依次加入20-3(2.0g)，5-溴-2-硝基吡啶(1.82g)，N,N-二甲基亚砜20mL，三乙胺(910mg)，油浴升温至80℃反应过夜,降温至室温。加水50mL淬灭反应,乙酸乙酯75mL萃取3次,饱和食盐水100mL反洗3次,无水硫酸钠干燥，旋干。粗品硅胶柱层析(洗脱剂乙酸乙酯:戊烷＝1:5-2:1)。旋干后得20-4。步骤4：向100mL三口瓶中依次加入20-4(1.1g)，乙醇50mL，醋酸5mL，升温至70℃，批量加入铁粉(951mg)，70℃反应2小时,降温至室温。过滤，收集滤液,滤液旋干。1N氢氧化钠溶液调节pH＝8-9,乙酸乙酯75mL萃取3次,饱和食盐水100mL反洗2次,无水硫酸钠干燥，旋干得20-5。中间体21-3的合成ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：氮气保护下，向250mL三口瓶中依次加入18-5(2.62g),二氯甲烷(102mL)。0℃滴加三氟乙酸(10.2mL),3分钟滴完。室温反应4h。旋干得到21-1。步骤2：氮气保护下，向250mL三口瓶中依次加入21-1(2.25g),甲醇(160mL),甲醛(695mg)。0℃依次加入乙酸(899mg)，氰基硼氢化钠(566mg)。0℃反应5min。加冰水160mL淬灭反应。饱和碳酸钠溶液调pH为9，160mL乙酸乙酯萃取3次。500mL饱和食盐水反洗3次。无水硫酸钠干燥，旋干得21-2。步骤3：氮气保护下，向250mL单口瓶中依次加入21-2(970mg),甲醇50mL,二氯甲烷(50mL),Pd/C(10％,0.97g),甲酸铵(970mg)，室温反应过夜。过滤，浓缩，用C18柱纯化,旋干得21-3。中间体22-3的合成ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：氮气保护下，向250mL三口瓶中依次加入19-1(2.21g),二氯甲烷121mL。0℃加入三氟乙酸12.1mL。室温反应4h。旋干，得到22-1。步骤2：氮气保护下，向250mL三口瓶中依次加入22-1(2.08g)，甲醇150mL,甲醛(642mg)。0℃依次加入乙酸(830mg)，氰基硼氢化钠(523mg)。0℃反应5分钟,加冰水150mL淬灭反应。饱和碳酸钠溶液调pH为9，150mL乙酸乙酯萃取3次。500mL饱和食盐水反洗3次，无水硫酸钠干燥，旋干得22-2。步骤3：氮气保护下，向100mL单口瓶中依次加入22-2(720mg),甲醇50mL,二氯甲烷(50mL)，钯碳0.72g，甲酸铵(720mg)，室温反应过夜。过滤，浓干，用C18柱纯化，旋干得22-3。中间体23-5的合成ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：250mL三口瓶中，5℃下将间氯过氧苯甲酸(m-CPBA,12g)分批加到1-甲基环戊烯(3.8g)的二氯甲烷(100mL)溶液中，室温反应16小时。反应液过滤，滤液用水(100mL)，碳酸氢钠水溶液(150mL)和硫代硫酸钠水溶液(150mL)萃洗。有机相干燥，过滤，浓缩得到23-2。步骤2：将氨水(8mL)加到23-3(2.4g)的乙醇(8mL)溶液中，85℃下在玻璃闷罐中反应6小时。反应液冷却到室温，浓缩得到23-3。步骤3：100mL单口瓶中，将5-溴-2,4-二氯嘧啶(1.26g)溶于乙醇(20mL)中，然后加入23-3(0.9g)，N，N-二异丙基乙胺(2.1g)，室温反应过夜。反应液浓缩后加入水(50mL)，用乙酸乙酯(100mL)萃取。有机相干燥，过滤，浓缩，石油醚重结晶得23-4。步骤4：氮气保护下，-78℃下将二乙氨基三氟化(DAST,1.5g)加到23-4(1.3g)的二氯甲烷(40mL)溶液中，-78℃下反应1小时。-78℃下加入异丙醇淬灭，升到室温，反应液用水(30mL)，碳酸氢钠水溶液(30mL)萃洗。有机相干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝1:10)纯化，得到23-5。中间体26-1(顺式)和27-1(反式)的合成ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1:氮气保护下，在1L四口瓶中，将5-溴-2,4-二氯嘧啶(70g)溶于600mL二氧六环中，降温至11℃，滴加三乙胺(62.5g),3-4(30g)的二氧六环溶液，加毕，室温反应过夜。将体系倒入1L冰水混合物淬灭反应。用1L乙酸乙酯萃取3次，有机相合并后用0.5L饱和食盐水反洗3次，有机相用无水NaSO₄干燥后浓缩干。粗品硅胶柱层析(洗脱剂石油醚/乙酸乙酯＝100:1–30:1)，收集产品浓缩得3-5。步骤2:在1L单口瓶中，将3-5(23g)，(E)-2-丁烯酸(17.3g),N,N-二异丙基乙胺(104g)溶于500mL四氢呋喃中，用氮气置换空气3次，再加入三(邻甲苯基)膦(2.42g)和二(氰基苯)二氯化钯(1.5g)，再用氮气置换空气3次，升温80℃反应过夜。将反应体系降至室温后浓缩干。粗品硅胶柱层析(洗脱剂石油醚:乙酸乙酯＝5:1–1:1)，收集产品浓缩得3-6。步骤3:在1L三口瓶中，将3-6(40g)溶于乙酸酐(200mL)中，升温至130℃，反应2h。反应体系降至室温后将乙酸酐旋干。粗品硅胶柱层析(洗脱剂油醚:乙酸乙酯＝10:1–4:1)得混合物。混合物用正相快速柱层析分离纯化，分别收集产品峰浓缩得到第一个峰26-1(顺式)3.6g黄色固体和第二个峰27-1(反式)1.7g黄色固体。实施例实施例1A和1Bntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>步骤1：1-7的合成在250mL三口瓶中，氮气保护下加入2,2-二氟环戊胺盐酸盐(6.0g)，70mL二氧六环，三乙胺(33g)。降温到10℃以下，分批加入5-溴-2,4-二氯嘧啶(7.5g)，室温反应过夜。加100mL乙酸乙酯稀释，用3x100mL水反洗，无水硫酸钠干燥，过滤后硅胶柱层析(洗脱剂乙酸乙酯：石油醚＝1:50-1:30)得到1-7。步骤2：1-8的合成在250mL三口瓶中，氮气保护下加入1-7(5g)，正丁醇(70mL)，(E)-2-丁烯酸(6.86g)，N,N-二异丙基乙胺(20.5g)。置换空气三次，加入三(邻甲苯基)膦(2.42g)和二(氰基苯)二氯化钯(1.5g)，升温至95℃反应过夜。降至室温，旋干溶剂后直接硅胶柱分离(洗脱剂乙酸乙酯:石油醚＝1:10-1:2)得1-8。步骤3：1-9的合成在50mL单口瓶中，加入1-8(2.8g)和乙酸酐(15mL)，升至130℃反应2小时。降至室温，旋干溶剂后直接硅胶柱分离(洗脱剂乙酸乙酯:石油醚＝1:20-1:10)得到1-9。步骤4：1-10的合成在50mL单口瓶中，加入1-9(1.5g)，20mL乙腈/甲醇(3:1)，N-溴代丁二酰亚胺(NBS,1.2g)。升至80℃反应2小时。加50mL乙酸乙酯稀释，用3x50mL水反洗，无水硫酸钠干燥，过滤后滤液旋干。硅胶柱层析(洗脱剂乙酸乙酯:石油醚＝1:50-1:20)得1-10。步骤5：1-11的合成在100mL三口瓶中，氮气保护下加入J(1.29g)和20mL甲苯。降温至10℃，加入六甲基二硅基胺基锂(1.29g)，并在该温度下搅拌1小时。在10℃下，分批加入1-10(0.8g)，回到室温反应过夜。过滤，收集滤饼，并用3x10mL的水和2x20mL的正己烷洗涤，得到1-11。步骤6：1-12的合成在100mL三口瓶中，氮气保护下加入1-11(0.23g)，正丁醇(20mL)，乙烯基正丁基醚(0.18g)，N,N-二异丙基乙胺(0.14g)。置换空气三次，加入1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(0.03g)，升温至95℃反应过夜。降至室温，旋干溶剂后直接硅胶柱分离(洗脱剂乙酸乙酯:石油醚＝1:20-1:3)得到1-12。步骤7：1-13的合成在50mL的三口瓶中，氮气保护下加入1-12(0.13g)，盐酸(15mL,6N)。室温反应2h。降至室温，旋干溶剂得1-13。步骤8：手性制备分离制备柱：CHIRALPAK AD-H SFC5*25cm,5um，流动相：A相:CO₂:50,B相:EtOH(0.2％DEA)-HPLC:50；循环时间：12分钟，检测波长：220nm。手性HPLC分析(Phenomenex Lux Cellulose-4柱)：实施例1A(保留时间＝28.6分钟)对应手性分离中的第一个峰。实施例1B(保留时间＝23.9分钟)对应手性分离中的第二个峰。实施例1A:LC-MS(ES,m/z):484[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,CDCl₃,ppm):δ8.86(s,1H),8.34(s,1H),8.17(d,J＝9Hz,1H),8.07(d,J＝3Hz,1H),7.35-7.27(m,1H),6.27-6.11(m,1H),3.50-3.09(m,8H),2.89-2.63(m,2H),2.56(s,3H),2.41(s,3H),2.31-2.10(m,4H)。实施例1B:LC-MS(ES,m/z):484[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,CDCl₃,ppm):δ8.84(s,1H),8.33(s,1H),8.16(d,J＝9Hz,1H),8.06(d,J＝3Hz,1H),7.35-7.26(m,1H),6.25-6.11(m,1H),3.49-3.10(m,8H),2.86-2.61(m,2H),2.54(s,3H),2.40(s,3H),2.30-2.11(m,4H)。实施例2ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="331"/>除了在步骤1中以2-4代替1-6以外，按照实施例1中的相似方法合成实施例2的化合物。LC-MS(ES,m/z):462[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,DMSO,ppm):δ10.02(1H,s),8.87(1H,s),8.04-8.03(1H,d,J＝3Hz),7.86-7.83(1H,d,J＝8.7Hz),7.46-7.42(1H,dd,J＝9.2Hz,J＝3.0Hz),3.32-3.07(4H,m),2.94-2.87(4H,m),2.38(3H,s),2.28(3H,s),1.73-1.56(11H,m)。实施例3ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="331"/>除了在步骤1中以3-4代替1-6以外，按照实施例1中的相似方法合成实施例3的化合物。LC-MS(ES,m/z):460[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,CDCl₃,ppm):δ10.12(s,1H),8.94(s,1H),8.03(s,1H),7.87(d,J＝7.5Hz,1H),7.42(d,J＝6.9Hz,1H),6.09-6.00(m,1H),3.06(s,4H),2.86(s,4H),2.42(s,3H),2.30(s,3H),1.84(m,2H),1.49(s,1H),1.32-1.24(m,4H),0.46(s,1H)。实施例4ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="371"/>除了在步骤1中以4-6代替1-6以外，按照实施例1中的相似方法合成化合物4，将其用反相柱纯化，得实施例4的化合物4的三氟乙酸盐。LC-MS(ES,m/z):474[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,CD₃OD,ppm):δ0.10-0.70(4H,m),1.32-2.22(4H,m),2.43(3H,s),2.51-2.56(5H,m),3.46-3.50(8H,m),5.95-6.02(1H,m),7.78(1H,br s),7.93-7.96(1H,d,J＝6.6Hz),8.05(1H,s),9.02(1H,s)。实施例5A和5Bntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>除了在步骤1中以5-3代替1-6以外，按照实施例1中的相似方法合成。手性分离，得到实施例5A和实施例5B的化合物。手性制备分离，制备柱：CHIRALPAK AD-H SFC5*25cm,5um，流动相：A相:CO2:50,B相:EtOH(0.2％DEA)-HPLC:50；循环时间：6分钟，检测波长：220nm。手性HPLC分析(CHIRALPAK IC柱)：实施例5A(保留时间＝44.8分钟)对应手性分离中的第一个峰。实施例5B(保留时间＝53.5分钟)对应手性分离中的第二个峰。实施例5A:LC-MS(ES,m/z):474[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,CF₃COOD,ppm):δ1.15-1.82(7H,m),2.39(3H,s),2.40-2.76(6H,m),3.64-3.72(8H,m),4.96-5.24(1H,m),7.89-8.16(3H,m),9.07-9.08(1H,d,J＝3.6Hz)。实施例5B:LC-MS(ES,m/z):474[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,CF₃COOD,ppm):δ1.32-1.74(7H,m),2.40(3H,s),2.47-2.75(6H,m),3.66-3.71(8H,m),5.19-5.23(1H,m),7.89-7.92(1H,d,J＝9.3Hz),8.06(1H,s),8.13-8.16(1H,d,J＝9.6Hz),9.08(1H,s)。实施例6ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="382"/>除了在步骤1中以6-4代替1-6以外，按照实施例1中的相似方法合成化合物6，将其用反相柱纯化，得实施例6的化合物6的三氟乙酸盐。LC-MS(ES,m/z):460[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,D₂O,ppm):δ8.99(1H,s),8.06-8.02(1H,dd,J＝9.3Hz,J＝2.7Hz),7.81(1H,s),7.48-7.45(1H,m),6.16-6.07(1H,m),3.70-3.64(8H,m),2.45(3H,s),2.32(3H,s),2.17-1.90(4H,m),1.36(2H,m),0.85(1H,m),0.54(1H,m)。实施例7A和7Bntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>除了在步骤1中以7-6代替1-6以外，按照实施例1中的相似方法合成。手性分离，得到实施例7A和实施例7B的化合物。手性制备分离，制备柱：CHIRALPAK AD-H SFC5*25cm,5um，流动相：A相:CO2:50,B相:EtOH(0.2％DEA)-HPLC:50；循环时间：12分钟，检测波长：220nm。手性HPLC分析(CHIRALPAK AD-H柱)：实施例7A(保留时间＝30.7分钟)对应手性分离中的第一个峰。实施例7B(保留时间＝38.6分钟)对应手性分离中的第二个峰。实施例7A:LC-MS(ES,m/z):484[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,CDCl₃,ppm):δ8.83(s,1H),8.13-8.04(m,2H),7.98(s,1H),7.37-7.33(m,1H),6.19-6.12(m,1H),3.18-3.11(m,8H),2.64(m,2H),2.57(s,3H),2.40(s,3H),2.39-2.15(s,3H)。实施例7B:LC-MS(ES,m/z):484[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,CDCl₃,ppm):δ8.83(s,1H),8.13-8.05(m,2H),7.97(s,1H),7.6(d,J＝3Hz,1H),6.21-6.13(m,1H),3.18-3.11(m,8H),2.65(s,2H),2.57(s,3H),2.40(s,3H),2.39-2.15(s,3H)。实施例8ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="386"/>除了在步骤1中以8-5代替1-6以外，按照实施例1中的相似方法合成实施例8的化合物。LC-MS(ES,m/z):449[M+H]⁺；H-NMR(400MHz,CD₃OD,ppm):δ9.14(s,1H),8.20-8.17(m,1H),8.01(d,J＝2.8Hz,1H),7.62(d,J＝9.2Hz,1H),3.57-3.54(m,4H),3.45-3.43(m,4H),2.50(s,3H),2.43(s,3H)，2.31-2.26(m,2H),2.10-2.08(m,2H),2.07-1.90(m,2H)，1.90-1.67(m,2H)。实施例9ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="359"/>除了在步骤1中以3,3-二氟环丁胺代替1-6以外，按照实施例1中的相似方法合成化合物9，将其用盐酸处理，得实施例9的化合物9的盐酸盐。LC-MS(ES,m/z):470[M+H]⁺；H-NMR(400MHz,CD₃OD,ppm):δ9.16(s,1H),8.21(dd,J＝2.4Hz,9.6Hz,1H),8.01(d,J＝2.4Hz,1H),7.61(d,J＝9.6Hz,1H),5.72-5.67(m,1H),3.57-3.55(m,6H),3.35-3.25(m,4H),3.06-2.98(m,2H),2.52(s,3H),2.45(s,3H)。实施例10ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="386"/>除了在步骤1中以10-8代替1-6以外，按照实施例1中的相似方法合成实施例10的化合物。LC-MS(ES,m/z):474[M+H]⁺；H-NMR(400MHz,CD₃OD,ppm):δ9.06(s,1H),8.15(dd,J＝2.8Hz,9.6Hz,1H),7.96(d,J＝2.8Hz,1H),7.61(d,J＝9.6Hz,1H),4.29(s,1H),3.42-3.54(m,8H),3.25(s,2H),2.46(s,3H),2.38(s,3H),1.84(m,2H),1.54(m,2H),1.34(m,4H)。实施例11ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="457"/>除了在步骤2中以11-3代替1-7以外，按照实施例1中的相似方法合成实施例11的化合物。LC-MS(ES,m/z):473[M+H]⁺；H-NMR(400MHz,CD₃OD,ppm):δ9.07(s,1H),8.02(d,J＝2.8Hz,1H),7.94(dd,J＝2.4Hz,9.6Hz,1H),7.82(d,J＝9.6Hz,1H),6.38-6.30(m,1H),3.49-3.40(m,9H),2.61-2.56(m,2H),2.49(s,3H),2.43(s,3H),2.22-2.15(m,2H),2.06-2.03(m,1H),1.70-1.65(m,1H)。实施例12ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="386"/>除了在步骤1中以环戊胺代替1-6,在步骤5中以12-3代替J以外，按照实施例1中的相似方法合成实施例12的化合物。LC-MS(ES,m/z):474[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,CDCl₃,ppm):δ1.69-2.07(10H,m),2.24-384(5H,m),2.56(3H,s),2.98-3.01(2H,d,J＝10.5Hz),3.42-3.46(2H,d,J＝10.5Hz),3.72(2H,m),2.83-5.95(1H,m),7.19-7.23(1H,dd,J₁＝2.4Hz,J₂＝9.3Hz),7.94-7.95(1H,m),8.03(1H,m),8.10-8.13(1H,d,J＝9.3Hz),8.81(1H,s)。实施例13ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="406"/>除了在步骤1中以环戊胺代替1-6,在步骤5中以13-3代替J以外，按照实施例1中的相似方法合成化合物13，将其用反相柱纯化，得实施例13的化合物13的三氟乙酸盐。LC-MS(ES,m/z):474[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,d₆-DMSO,ppm):δ0.96-0.98(2H,m),1.00-1.09(2H,m),1.58-1.90(6H,m),2.21-2.27(2H,m),2.32(3H,s),2.43(3H,s),3.32(2H,s),3.41-3.43(4H,m),5.80-5.86(1H,m),7.56-7.60(1H,dd,J₁＝2.7Hz,J₂＝9.3Hz),7.88-7.91(1H,d,J＝9Hz),8.10-8.11(1H,d,J＝2.7Hz),8.97(1H,s),9.21(1H,br s),10.31(1H,s)。实施例14ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="407"/>除了在步骤1中以环戊胺代替1-6,在步骤5中以14-3代替J以外，按照实施例1中的相似方法合成化合物14，将其用反相柱纯化，得实施例14的化合物14的三氟乙酸盐。LC-MS(ES,m/z):460[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,d₆-DMSO,ppm):δ1.59-1.96(m,6H),2.14-2.25(m,3H),2.31(s,3H),2.43(s,3H),3.21-3.29(m,3H),3.64-3.67(m,1H),4.49(s,1H),4.70(s,1H),5.81-5.86(m,1H),7.27-7.30(d,1H,J＝8.7Hz),7.81-7.84(m,2H),8.54-8.57(m,1H),8.95(br s,1H),9.02(s,1H),10.21(s,1H)。实施例15ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="404"/>除了在步骤2中以15-1代替1-7以外，按照实施例1中的相似方法合成实施例15的化合物。LC-MS(ES,m/z):473[M+H]⁺；H-NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ9.07(s,1H),8.02(d,J＝2.8Hz,1H),7.94(dd,J＝2.4Hz,9.6Hz,1H),7.82(d,J＝9.6Hz,1H),6.38-6.30(m,1H),3.49-3.40(m,9H),2.61-2.56(m,2H),2.49(s,3H),2.43(s,3H),2.22-2.15(m,2H),2.06-2.03(m,1H),1.70-1.65(m,1H)。实施例16ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="408"/>除了在步骤1中以环戊胺代替1-6,在步骤5中以16-2代替J以外，按照实施例1中的相似方法合成实施例16的化合物。LC-MS(ES,m/z):475[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,CDCl₃,ppm):δ1.40-1.87(9H,m),2.21-2.32(3H,m),2.33(3H,s),2.44(3H,s),2.86-2.89(2H,d,J＝9.9Hz),3.42-3.46(2H,d,J＝10.8Hz),4.39-4.47(2H,m),5.72-5.87(1H,m),7.69-7.92(3H,m),8.98(1H,s),10.74(1H,br s)。实施例17ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="360"/>除了在步骤1中以环戊胺代替1-6,在步骤5中以17-5代替J以外，按照实施例1中的相似方法合成实施例17的化合物。LC-MS(ES,m/z):475[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,CDCl₃,ppm):δδ1.75-1.91(2H,m),1.93-2.04(2H,m),2.08-2.11(3H,m),2.26-2.41(6H,m),2.44(3H,s),2.51(3H,s),2.67-2.78(1H,m),3.17-3.32(1H,m)4.38-4.48(2H,m),6.00-6.06(1H,m),6.63-6.65(1H,d,J＝5.7Hz),7.86-7.89(1H,d,J＝9.0Hz),8.28-8.32(1H,dd,J＝2.1Hz,J＝9.0Hz),8.44(1H,s),9.10(1H,s)。实施例18ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="351"/>除了在步骤1中以环戊胺代替1-6,在步骤5中以18-6代替J以外，按照实施例1中的相似方法合成实施例18的化合物。LC-MS(ES,m/z):503[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,CDCl₃,ppm):δ1.60-1.94(m,10H),2.23-2.29(m,2H),2.33(s,3H),2.43(s,3H),2.60-2.67(m,1H,J＝21.9Hz),2.81-2.86(d,1H,J＝15.9Hz),3.48-3.60(m,3H),3.99-4.04(d,1H,J＝14.1Hz),5.81-5.92(m,1H),7.64-7.68(m,1H),8.07-8.10(d,1H,J＝9Hz),8.18-8.18(d,1H,J＝2.4Hz),9.02(s,1H),10.43(s,1H)。手性HPLC分析(Lux Cellulose-4柱)：实施例18(保留时间＝21.5分钟)。实施例19ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="348"/>除了在步骤1中以环戊胺代替1-6,在步骤5中以19-2代替J以外，按照实施例1中的相似方法合成实施例19的化合物。LC-MS(ES,m/z):503[M+H]⁺；H-NMR(DMSO,300MHz,ppm):δ1.59-1.93(m,10H),2.23-2.33(m,2H),2.34(s,3H),2.47(s,3H),2.59-2.67(m,1H),2.81-2.86(d,1H,J＝15.3Hz)，3.48-3.58(m,3H),3.99-4.04(d,1H,J＝14.4Hz),5.81-5.92(m,1H),7.64-7.68(m,1H),8.07-8.09(d,1H,J＝8.7Hz),8.17-8.18(d,1H,J＝2.4Hz),9.01(s,1H),10.43(s,1H)。手性HPLC分析(Lux Cellulose-4柱)：实施例19(保留时间＝15.2分钟)。实施例20ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="362"/>除了在步骤1中以环戊胺代替1-6,在步骤5中以20-5代替J以外，按照实施例1中的相似方法合成实施例20的化合物。LC-MS(ES,m/z):503[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,d_6-DMSO,ppm):δ1.48-2.32(14H,m),2.43(3H,s),3.04-3.14(4H,m),4.40-4.49(2H,m),5.78-5.87(1H,m),7.48-7.50(1H,d,J＝5.7Hz),7.86-7.92(1H,m),8.08(1H,s),8.74(1H,broad s),8.90-8.96(2H,m),10.19(1H,s)。实施例21ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="458"/>除了在步骤1中以环戊胺代替1-6,在步骤5中以21-3代替J以外，按照实施例1中的相似方法合成化合物21，将其用反相柱纯化，得实施例21的化合物21的三氟乙酸盐。LC-MS(ES,m/z):516[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,d₆-DMSO,ppm):δ1.60-1.67(m,2H),1.81-1.83(m,6H),1.96-2.30(m,4H,),2.33(S,1H),2.50-2.51(m,3H),2.83-2.90(d,4H),3.19-3.25(d,1H),3.83-3.90(m,1H),4.02-4.12(m,2H),4.33-4.37(d,1H),5.84-5.90(m,1H),7.77-7.81(m,1H),8.11-8.29(d,1H),8.03(s,1H),9.02(s,1H),10.09(s,1H),10.52(s,1H)。手性HPLC分析(Lux Cellulose-4柱)：实施例21(保留时间＝34.7分钟)。实施例22ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="459"/>除了在步骤1中以环戊胺代替1-6,在步骤5中以22-3代替J以外，按照实施例1中的相似方法合成化合物22，将其用反相柱纯化，得实施例22的化合物22的三氟乙酸盐。LC-MS(ES,m/z):516[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,d₆-DMSO,ppm):1.95-2.01(m,2H),2.14-2.16(m,6H),2.23-2.30(m,4H),2.38(s,1H),2.51(s,3H),2.83-2.90(m,4H),3.21-3.26(d,1H,J＝17.1Hz),3.83-3.90(m,1H,J＝23.1Hz),4.00-4.13(m,2H),4.33-4.39(d,1H,J＝17.1Hz),5.85-5.91(m,1H),7.78-7.82(m,1H),8.11-8.14(d,1H,J＝8.7Hz),8.30-8.31(d,1H,J＝2.4Hz),9.03(s,1H),10.14(s,1H),10.53(s,1H)。手性HPLC分析(Lux Cellulose-4柱)：实施例22(保留时间＝24.2分钟)。实施例23ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="409"/>除了在步骤1中以23-5代替1-6以外，按照实施例1中的相似方法合成实施例23的化合物。LC-MS(ES,m/z):480[M+H]⁺；H-NMR(400MHz,d₆-DMSO,ppm):δ10.15(s,1H),8.92(s,1H),8.07(d,J＝2.4Hz,1H),7.90(d,J＝8.4Hz,1H),7.52(dd,J＝2.4,8.8Hz,1H),5.79(m,1H),3.17-3.18(m,8H),3.04(m,1H),2.38(s,3H),2.29(s,3H),2.22(m,1H),2.00(m,1H),1.80(m,2H),1.55(m,1H),1.32(d,J＝22Hz,3H)。实施例24A和24Bntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>除了在步骤5中以18-6代替J以外，按照实施例1中的相似方法合成。手性分离中间体24-11得到24-11A和24-11B，然后可参照实施例1合成线路中的步骤6和7得到实施例24A和实施例24B的化合物。所得消旋体中间体化合物24-11用Pre-SFC手性制备分离，制备柱：DAICELCHIRALPAK AD-H 19*250mm,5um；流动相：A相:HEX(0.1％DEA),B相:ETOH；梯度：Phase A/Phase B＝70/30；检测波长：220nm。分别收集两个峰，第一个峰24-11A(出峰时间：8.1分钟)和第二个峰24-11B(出峰时间：11.2分钟)手性HPLC分析(CHIRALPAK IC柱)：实施例24A(保留时间＝8.53分钟)对应手性分离中的第一个峰。实施例24B(保留时间＝8.73分钟)对应手性分离中的第二个峰。实施例24A:LC-MS(ES,m/z):538[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,CDCl₃,ppm):δ1.75-2.34(6H),2.42(s,3H),2.50(3H),2.54-2.99(m,4H),3.57-3.65(m,1H),3.72-3.84(m,2H),4.19-4.24(m,1H),6.16-6.21(m,1H),7.57-7.61(m,1H),8.24-8.25(d,1H,J＝2.7Hz),8.34-8.37(d,1H,J＝9.0Hz),8.56(br s,1H),8.89(s,1H)。实施例24B:LC-MS(ES,m/z):538[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,CDCl₃,ppm):δ1.76-1.88(m,2H),2.03-2.04(m,2H),2.08-2.33(m,4H),2.42(s,3H),2.54(s,3H),2.68-2.83(m 2H),2.96-2.99(m,2H),3.58-3.66(m,1H),3.76-3.81(m,2H),4.17-4.22(d,1H,J＝14.7Hz),6.14-6.22(m,1H),7.59-7.63(m,1H),8.24-8.25(d,1H,J＝2.4Hz),8.36-8.39(d,1H,J＝9.0Hz),8.86(br s,1H),8.92(s,1H)实施例25A和25Bntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>除了在步骤5中以19-2代替J以外，按照实施例1中的相似方法合成。手性分离中间体25-12得到25-12A和25-12B，然后可参照实施例1合成线路中的步骤7得到实施例25A和实施例25B的化合物。所得消旋体中间体化合物25-12用Pre-SFC手性制备分离，制备柱：ChiralpakAS-H5*25cm,5um，流动相：A相:CO2:50,B相:MEOH(0.2％DEA):50；循环时间：3.4分钟，检测波长：220nm。分别收集两个峰，第一个峰25-12A(出峰时间：5.51分钟)和第二个峰25-12B(出峰时间：6.76分钟)。实施例25A:LC-MS:(ES,m/z):538[M+H]⁺；H-NMR(300MHz,CDCl₃,ppm):δ1.78-2.33(m,6H),2.42(s,3H),2.53(s,3H),2.73-2.83(m,2H),2.95-2.96(m,2H),3.58-3.65(m,1H),3.76-3.81(m,2H),4.15-4.20(d,1H,J＝14.7Hz),6.14-6.22(m,1H),7.59-7.63(m,1H),8.23-8.24(d,1H,J＝2.4Hz),8.35-8.38(d,1H,J＝9.0Hz),8.66(br s,1H),8.90(s,1H).实施例25B:LC-MS:(ES,m/z):538[M+H]⁺；H-NMR:(300MHz,CDCl₃,ppm):δ1.74-2.27(m,6H),2.42(s,3H),2.54(s,3H),2.73-2.82(m,2H),2.95-2.96(m,2H),3.57-3.64(m,1H),3.77-3.79(m,2H),4.13-4.18(d,1H,J＝14.7Hz),6.13-6.21(m,1H),7.57-7.61(m,1H),8.25-8.26(d,1H,J＝2.4Hz),8.34-8.37(d,1H,J＝9.0Hz),8.62(br s,1H),8.90(s,1H).实施例26A和26Bntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>从26-1到26-4和26-5的合成可参照实施例1合成线路中的步骤4,5和步骤6。手性分离方法得到26-4和26-5。制备柱：CHIRALPAK AD-H SFC5*25cm,5um，流动相：A相:CO2:50,B相:EtOH(0.2％DEA)-HPLC:50；循环时间：6分钟，检测波长：220nm。26-4对应手性分离中的第一个峰(保留时间＝8.69分钟)。26-5对应手性分离中的第二个峰(保留时间＝10.98分钟)。从26-4到26-5到最终产物的合成可参照实施例1合成线路中的步骤7。实施例26A:LC-MS:(ES,m/z):513[M+H]⁺；H-NMR:(300MHz,CDCl₃,ppm):δ0.63-0.66(m,1H),1.34-2.34(m,7H),2.38(s,3H),2.44-2.50(m,1H),2.55(s,3H),3.01-3.09(m,1H),3.38-3.44(m,1H),3.67-3.74(m,2H),4.12-4.19(m,2H),4.61-4.65(m,1H),6.01-6.08(m,1H),7.57-7.61(m,1H),8.14-8.21(m,2H),8.42-8.45(d,1H,J＝8.7Hz),8.82(s,1H)。实施例26B:LC-MS:(ES,m/z):513[M+H]⁺；H-NMR:(300MHz,CDCl3,ppm):δ0.72-0.74(m,1H),1.35-2.37(m,7H),2.42(s,3H),2.43-2.52(m,1H),2.54(s,3H),2.97-3.14(m,2H),3.58-3.65(m,1H),3.79-3.83(m,2H),4.19-4.24(m,1H),5.89-5.90(m,1H),7.57-7.61(m,1H),8.20-8.21(m,2H),8.45-8.46(m,1H),8.83(s,1H)。实施例27A和27Bntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>从27-1到27-4和27-5的合成可参照实施例1合成线路中的步骤4,5和步骤6。手性分离方法得到27-4和27-5。制备柱：CHIRALPAK AD-H SFC5*25cm,5um，流动相：A相:CO2:50,B相:EtOH(0.2％DEA)-HPLC:50；循环时间：6分钟，检测波长：220nm。27-4对应手性分离中的第一个峰(保留时间＝20.2分钟)。27-5对应手性分离中的第二个峰(保留时间＝26.5分钟)。从27-4到27-5到最终产物的合成可参照实施例1合成线路中的步骤7。实施例27A:LC-MS:(ES,m/z):513[M+H]⁺；H-NMR:(300MHz,CDCl₃,ppm):δ0.72-0.75(m,1H),1.35-2.07(m,5H),2.38(s,3H),2.55-2.98(m,4H),2.97-2.98(m,2H),3.58-3.65(m,1H),3.78-3.83(m,2H),4.18-4.23(m,2H),5.88-5.89(m,1H),7.57-7.61(m,1H),8.18-8.20(m,2H),8.42-8.47(d,1H,J＝9.0Hz),8.82(s,1H)。实施例27B:LC-MS:(ES,m/z):513[M+H]⁺；H-NMR:(300MHz,CDCl₃,ppm):δ0.72-0.74(m,1H),1.35-2.10(m,5H),2.42(s,3H),2.54-2.58(m,4H),2.97-2.98(m,2H),3.58-3.65(m,1H),3.79-3.83(m,2H),4.19-4.24(m,2H),5.89-5.90(m,1H),7.57-7.61(m,1H),8.20-8.21(m,2H),8.45-8.46(m,1H),8.83(s,1H)。实验实施例CDK4和CDK6激酶体外活性实验方法CDK4和CDK6激酶体外活性筛选实验采用方法为Caliper Mobility Shift Assay,该方法是以微流体芯片技术的迁移率检测技术为核心的检测平台。实验配置：1x CDK4激酶反应缓冲液(20mM HEPES,pH 7.5,0.01％Triton X-100,10mM MgCl₂,2mM DTT)；1xCDK6激酶反应缓冲液(50mM HEPES,pH 7.5,0.0015％Brij-35,10mM MgCl₂,2mMDTT)；激酶反应终止液(100mM HEPES,pH 7.5,0.015％Brij-35,0.2％Coating Reagent#3,50mM EDTA)；2.5x CDK4激酶溶液[25nM CDK4激酶/cyclin D3(Carna,Cat#04-105)在1x CDK4激酶溶液]；2.5x CDK6激酶溶液[50nM CDK6激酶/cyclin D3(Carna,Cat#04-107)在1x CDK6激酶溶液]；2.5x底物肽溶液[7.5μM底物肽FAM-P8(GL Biochem,Cat.#112396)和552.5μM ATP在1x CDK4激酶溶液中，或7.5uM FAM-P8和2mMATP在1x CDK6激酶溶液中]。CDK4激酶反应溶液最终浓度：10nM CDK4/Cyclin D3,3μM底物肽FAM-P8,221μM ATP,10mM MgCl₂，2mM DTT；CDK6激酶反应溶液最终浓度：20nM CDK6/Cyclin D3,3μM底物肽FAM-P8,800μM ATP,10mM MgCl₂,2mMDTT。实验步骤:先在96孔板中准备5x反应终浓度的化合物溶液：用100％DMSO配好50x反应终浓度的化合物溶液,用1x激酶反应缓冲液稀释至5x反应终浓度化合物溶液；在震荡器上震动10分钟；然后在384孔测试板中加入以下溶液：5uL的5x反应终浓度的化合物溶液(最终384孔测试板中1x反应化合物终浓度为0.1nM–1000nM和10μL的2.5x的CDK4或CDK6激酶溶液，室温孵育10分钟后再加入10μL的2.5x底物肽溶液，在28℃下放置一小时后加入25μL激酶反应终止液,1200RPM离心一分钟。最后将384孔测试板放入Caliper EZ Reader上收集测试数据(转化率)，通过GraphPad Prism V5.0软件计算出激酶的抑制曲线，并基于此数据计算出获得50％抑制效果所需的化合物浓度，即化合物的IC₅₀。ntent="drawing" img-format="TIF" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>