本发明提供了一种miRNA检测方法及应用。具体地，本发明提供了一种检测miRNA的新方法(称为aLHCD)，该方法包括：(a)将含miRNA的样品与双发夹核酸杂交探针进行液相杂交，从而形成含“miRNA-杂交探针”的第一复合物的液相混合物；(b)对第一复合物，用限制性内切酶进行消化，形成一端保留发夹结构区的第二复合物；(c)用单链外切酶对第二复合物进行消化，形成第三复合物；(d)以经双重消化的核酸探针为模板，用引物进行PCR扩增；(e)检测PCR扩增产物的存在与否和/或数量，得出待测miRNA的检测结果。本发明方法具有高特异、高灵敏和便利性等特点，不仅可同时检测多种miRNA，还可区分miRNA及其前体。本发明方法可应用于生物学检测和临床医学。
