本发明公开了一种诱导分化的细胞制备间充质干细胞的方法及调控靶点的组合。所述方法对分化的细胞进行定向诱导制备得到间充质干细胞,所述定向诱导包括抑制TGF‑β的信号通路,抑制PKC的活性,激活WNT/β‑catenin的信号通路以及激活cAMP的信号通路。本发明通过分阶段调控相应的信号通路和/或酶的活性将分化的细胞诱导为间充质干细胞,本发明通过采用小分子化合物组合分阶段调控相应的靶点,能够将分化的细胞重编程为间充质干细胞,各步骤可实现精准质控,便于标准化操作和规模化生产。本发明提供的方法供体来源广泛,患者本人即可作为供体,可在较短时间内获得基础研究、临床治疗或组织工程生产所需的间充质干细胞。