本发明公开了一种体外软骨细胞端粒延长增殖培养用培养基、试剂盒和应用。该体外软骨细胞端粒延长增殖培养用培养基,所述培养基是在DMEM/F12或RPMI1640基础培养基中加入血清、终浓度为5‑50μg/ml的维生素C、终浓度为0.01‑2μg/ml的B18R或p65i、终浓度为0.1‑50ng/ml的雷帕霉素和终浓度为0.1‑50μM的白藜芦醇制备得到,所述血清是体积终浓度为1‑20%的人AB血清或体积终浓度为1‑20%的胎牛血清。通过使用本发明的体外软骨细胞端粒延长增殖培养用培养基或试剂盒,可以在体外对软骨细胞进行端粒酶mRNA转染,使后续培养得到的软骨细胞中端粒延长,并且可以显著提高软骨细胞尤其是老龄患者的软骨细胞的增殖与活力,对于改善或治疗衰老引起的细胞功能衰退,使其实际应用于再生医学治疗。