本发明公开了一种在毕赤酵母中表达重组蛋白的载体、基因及表达方法，尤其适用于对人组织激肽释放酶的重组表达。本发明的载体上含有编码间隔短肽的核苷酸序列，所述的间隔短肽的氨基酸序列为1‑10个EA或EEAEAEAEPK，同时，上述所述载体在间隔短肽核苷酸序列5，端连接有信号肽核苷酸序列。这使得在毕赤酵母中表达的目的基因比原来不加入间隔短肽时表达量提高，所述信号肽和间隔短肽在设计和使用时可以加在载体上，也可以加在目的蛋白的核苷酸序列上；同时在间隔短肽后再增加前肽使得所表达的hK1的N端结构与天然hK1一致，且目的蛋白经毕赤酵母系统表达后具有较高的生物学活性。
